?
Эпителиально-мезенхимальный переход в плаценте при преэклампсии
Преэклампсия (ПЭ) является серьезным гестационным осложнением, характеризуемым гипертензией, протеинурией и полиорганной недостаточностью. ПЭ является основной причиной материнской и перинатальной заболеваемости и смертности во всем мире. Тем не менее, этиология ПЭ до сих пор остается неясной. Наше исследование было проведено на плаценте и включало 38 пациентов: 14 с неосложненной беременностью; 13 с ранней ПЭ (рПЭ); и 11 с поздней ПЭ (пПЭ). Нами был проведен анализ иммунофенотипа клеток, выделенных из плаценты: все образцы биопсии были позитивно окрашено антителами на цитокератин 7, Sox2, Nestin, Vimentin и CD44. В ходе выполнения проекта в лаборатории митохондриальной медицины проводилось комплексное исследование уровня относительной экспрессии генов-участников различных сигнальных каскадов, которые могут быть вовлечены в развитие патологии прекэлампсии. Изучение генов интереса проводилось в биопсийных образцах плаценты от женщин контрольной группы и групп ранней и поздней преклампсии методом Вестерн-блота и ПЦР в реальном времени. Мы получили значимое увеличение уровня мРНК гена и продукции белка OPA1 в плацентепри рПЭ. Кроме того, наблюдалось снижение экспрессии белка TFAM по сравнению с контрольной группой (р <0,01). Число копий митохондриальной ДНК в плацентах при рПЭ была значимо выше, чем в образцах плаценты от нормальной беременности. Мы наблюдали увеличение максимального сопряженного дыхания в плацентарных митохондриях в присутствии субстратов I дыхательного комплекса в группе рПЭ и увеличение коэффициента эффективности окислительного фосфорилирования (P/O), активности цитрат-синтазы и снижение Са2 + индуцированной скорости деполяризации митохондрий в обеих группах ПЭ. Наши результаты свидетельствуют о существенном вкладе митохондриальной активности в адаптивный ответ на развитие ПЭ. Баланс между слиянием и фрагментацией митохондрий позволяет клетке адаптироваться к изменениям внешних условий, таким как гипоксия и условия окислительного стресса. Т.к. данные изменения могут служить свидетельством нарушений эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) в клетках трофобласта при преэклампсии, дальнейшей задачей явилось выяснение сигнального каскада, отвечающего за реализацию данного процесса. В настоящее время особый интерес представляет Wnt-путь. Поэтому проводилась оценка уровня относительной экспрессии маркеров ЭМП – участников сигнального пути Wnt: N-, E-кадгеринов, Vimentin (методом Вестерн-блот), генов SNAI1, beta-катенина и GSK3beta (методом ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции). Уровень относительной экспрессии маркера мезенхимальных клеток белка Vimentin (белка промежуточных филаментов) не различался между группами. Экспрессия E- и N-кадгеринов, обеспечивающих клеточную адгезию и межклеточные контакты, так же не изменялась при ранней и поздней преэклампсии. Важнейшими участниками канонического Wnt-сигнального пути являются белки beta-катенин и белок GSK3beta. Уровень относительной экспрессии этих генов также не отличался в исследуемых группах. Не изменялась также относительная экспрессия гена транскрипционного фактора SNAI1, способного супрессировать экспрессию E-кадгерина. На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что функционирование сигнального каскада с участием Wnt не изменяется при ранней и поздней преэклампсии, однако ЭМП в клетках трофобласта при преэклампсии может нарушаться за счет других сигнальных путей.