• A
  • A
  • A
  • АБB
  • АБB
  • АБB
  • А
  • А
  • А
  • А
  • А
Обычная версия сайта

Статья

Система in vitro для детекции маркеров рака предстательной железы методом LAMP

Биотехнология. 2020. Т. 36. № 1. С. 3-6.
Фомичева К. А., Макарова Ю. А.

Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) – это метод быстрой и высокоспецифичной
амплификации нуклеиновых кислот, позволяющий детектировать продукты реакции уже через
10‒20 мин после ее начала. На его основе разработан интраоперационный способ определения
метастазов в лимфатических узлах, получивший название одноэтапная амплификация нуклеиновых
кислот (OSNA) и заключающийся в быстрой детекции мРНК эпителийспецифичного гена KRT19.
Протокол OSNA был разработан более 10 лет назад для детекции метастазов рака молочной
железы в лимфатических узлах. За это время появилась новая версия ключевого фермента,
задействованного в реакции ‒ Bst-полимеразы, которая теперь обладает одновременно активностью
обратной транскриптазы, а также назрела необходимость адаптировать метод для других видов
злокачественных заболеваний, в частности рака предстательной железы (РПЖ). Первым шагом
является создание in vitro системы, моделирующей условия OSNA и позволяющей проводить LАMP
на клеточных линиях РПЖ. В исследовании подобраны клеточные линии: модель РПЖ DU-145
и отрицательный контроль Molt-4, ‒ имитирующие реальные условия проведения OSNA. Кроме
того, проведена оптимизация работы новой версии Bst-полимеразы, Bst 3.0, в условиях LAMP:
подобраны оптимальные концентрации нуклеозидтрифосфатов и отработана постановка LAMP
без применения обратной транскриптазы. В результате получена in vitro система, позволяющая
детектировать мРНК гена-маркера РПЖ KRT19 методом LAMP.