• A
  • A
  • A
  • АБB
  • АБB
  • АБB
  • А
  • А
  • А
  • А
  • А
Обычная версия сайта

Статья

Определение термодинамических параметров связывания и характер взаимодействия гемагглютинина вируса гриппа А/BANGKOK/1/1979 (Н3N2) с липосомами из фосфатидилхолина

Биомедицинская химия. 2020. Т. 66. № 5. С. 401-405.
Контаров Н., Долгова Е.И. Е., Погарская И., Контарова Е., Гришунина Ю. Б., Юминова Н.

Изучение взаимодействия поверхностных вирусных белков с модельными фосфолипидами важно для подробного изучения механизмов проникновения вирусов в клетки при инфицировании. Подходящей системой, моделирующей клеточную мембрану, являются липосомы. Методом равновесной адсорбции исследовали связывание гемагглютинина (НА) вируса гриппа с фосфатидилхолиновыми липосомами. Представлялось интересным выяснить, какие изменения в структуре белка происходят при переходе белковой молекулы с поверхности мембраны вглубь ее. Для этого в данной работе исследовали адсорбцию белок-липидного взаимодействия при образовании комплекса НА с фосфолипидами: адсорбцию НА на фосфолипидном бислое. Определение термодинамических параметров проводили с помощью уравнения Скэтчарда и уравнения Гиббса-Гельмгольца при рН 4,0 и 6,0. Анализ полученных результатов позволил определить гидрофобный тип взаимодействия вирусного белка с липосомами. Дополнительным подтверждением наличия гидрофобного белок-липидного взаимодействия послужило определение констант распределения гемагглютинина в двухфазных системах: декстран-полиэтиленгликоль (К1) и декстран-полиэтиленгликоль, этерифицированный пальмитиновой кислотой (К2). Наличие гидрофобного взаимодействия НА с мембраной липосом было также подтверждено с помощью метода тушения собственной белковой флуоресценции нейтральным тушителем акриламидом. При рН = 4,0 наблюдалось увеличение значения константы тушения Штерна-Фольмера для системы НА + липосомы из фосфатидилхолина, что вызвано структурными изменениями НА при встраивании в бислой липосомы. Рассчитанные с помощью уравнения Штерна-Фольмера константы скорости тушения флуоресценции указывают на статический механизм тушения, при котором тушитель взаимодействует с флуофорами неподвижной молекулы белка. Полученные результаты интересны не только с теоретической точки зрения изучения процесса слияния вируса с клеткой, но имеют и практическое применение. Так, используя значения константы связывания белка с бислоем и свободной энергии, можно подбирать оптимальный фосфолипидный состав липосом или виросом с целью получения более прочного их комплекса с различными вирусными белками. Использование двухфазных систем позволяет определять наличие гидрофобных участков на поверхности вирусного белка, что может быть использовано не только для оценки белок-липидного, но и белок-белкового взаимодействия.