?
Cytometric proteome profiling of GFP-tagged yeast for characterizing novel antifungals
Анализ клеточных ответов на антимикробные молекулы — один из способов понять механизмы действия потенциальных лекарственных препаратов. Часто это делают с помощью транскриптомики и протеомики, однако простых и недорогих методов для быстрой характеристики таких ответов не хватает. Чтобы восполнить этот пробел, мы оценили изменения в количестве панели из 64 «сигнальных» белков, слитых с GFP, у дрожжей Saccharomyces cerevisiae с помощью проточной цитометрии. Этот метод воспроизвел ожидаемые паттерны для классических противогрибковых препаратов и позволил выявлять общие механизмы действия у известных и новых соединений. Данные на уровне отдельных клеток также показали различающиеся ответы в количестве митохондриальных белков при воздействии тиазолидиновых противогрибковых соединений, а также нарушения клеточного цикла, вызванные различными веществами. Наконец, метод дал представление о ранее неизвестном механизме действия алкилированных нуклеозидов, которые могут применяться против грибов, обитающих на произведениях искусства. Эти вещества повышают уровень белков, участвующих в биосинтезе ароматических аминокислот, а также в ответе на окислительный стресс. Кроме того, нарушения биосинтеза триптофана и тирозина повышали эффективность этих соединений, тогда как антиоксиданты ее снижали. Наиболее неожиданно, что эффективность антиоксидантов зависела от биосинтеза ароматических аминокислот. Таким образом, наш подход и его возможные модификации для других микроорганизмов представляют собой простую и надежную платформу для выявления механизмов действия новых соединений.