Histone Abundance Quantification via Flow Cytometry of Htb2-GFP Allows Easy Monitoring of Cell Cycle Perturbations in Living Yeast Cells, Comparable to Standard DNA Staining

Journal of Fungi. 2023. Vol. 9. No. 10. Article 1033.

Kulakova M., Ghazy E. ., Ryabov F., Stanishevskiy Y., Alexandrov A., Agaphonov M.

Оценка изменений количества ДНК в отдельных клетках - хорошо зарекомендовавший себя метод изучения влияния различных возмущений на клеточный цикл. Недостатком этого метода является необходимость проведения процедуры фиксации, которая не позволяет проводить исследования in vivo, а также одновременный мониторинг дополнительных параметров, таких как флуоресценция меченых белков или генетически закодированных индикаторов. В данной работе мы представляем метод количественного определения обилия гистонов (HAQ) на живых дрожжах, содержащих GFP-меченый гистон Htb2. Мы показали, что этот метод позволяет получить данные, полностью совпадающие с уровнем ДНК, как в дрожжах Saccharomyces cerevisiae, так и в дрожжах Ogataea polymorpha. Протокол для анализа содержания ДНК также был оптимизирован, чтобы подходить как для дрожжей Ogataea, так и для Saccharomyces. Используя подход HAQ, мы продемонстрировали ожидаемые эффекты на прогрессию клеточного цикла для нескольких соединений и условий и показали возможность использования в сочетании с дополнительными флуорофорами. Таким образом, наши данные обеспечивают простой подход, который может быть использован в широком спектре исследований, где необходимо отслеживать влияние различных стимулов на клеточный цикл непосредственно в живых клетках.

Keywords: flow cytometry, histones, гистоны, пекарские дрожжи, cell cycle, клеточный цикл, yeast, проточная цитометрия