?
Метод эффективного выделения митохондрий высокой чистоты для "омиксных" исследований
Ультрацентрифугирование в градиенте плотности остается самым надежным способом получения высоко-очищенных препаратов митохондрий. Однако не всегда у исследователя есть необходимое оборудование, кроме того данный метод обладает невысоким выходом, что может иметь критическое значение, когда исходный биологический материал весьма скуден. В данной работе описан комбинированный метод выделения митохондрий для протеомных исследований, объединяющий разрушение клеток ультразвуком, дифференциальное центрифугирование и магнитную сепарацию. Метод позволяет добиться очень высокого обогащения препарата митохондриальными белками, значительно превышающего таковое при использовании дифференциального центрифугирования, магнитной сепарации или их комбинации, и дает самое эффективное устранение цитоплазматических компонентов, что показано с помощью двумерного гель-электрофореза, масс-спектрометрии и Вестерн-блоттинга. Кроме того, наш метод вдвое повышает выход митохондрий, однако он не должен использоваться в функциональных исследованиях этих органелл, так как большинство выделяемых митохондрий имеют нарушенную структуру, что показано методом электронной микроскопии.