?
Получение и характеристика иммуноконъюгатов на основе родамина В
Обоснование. Иммуноконъюгаты на основе моноклональных антител (МКАТ) обладают высоким потенциалом в иммунотерапии рака, однако на данный момент остаётся нерешённой проблема разработки эффективных методов их получения, особенно в случае, когда низкомолекулярный агент не имеет химических групп для присоединения к МКАТ.
Цель. Синтез иммуноконъюгатов на основе двух модифицированных молекул родамина В с четырьмя МКАТ и анализ их молекулярных и функциональных свойств.
Методы. Конъюгирование МКАТ c Rod-SMCC проводилось по восстановленным дисульфидным группам иммуноглобулина G (IgG). Rod-пиперазин присоединяли к окисленным олигосахаридам IgG. Оценку проведённого синтеза осуществляли спектрофотометрическими методами. Активность полученных конъюгатов определяли с помощью иммуноферментного анализа. Молекулярную гетерогенность полученных конъюгатов анализировали путём высокоэффективной хроматографии.
Результаты. Использование Rod-SMCC позволило получить иммуноконъюгаты по тиоловым группам со всеми исследованными антителами с максимальным насыщением для каждого антитела. Максимальное включение, около 10,96±1,3 моля Rod на моль IgG, было получено для МКАТ ICO 204, около 5,19±1,75 — для Трастузумаба. Данные значения плотности включения Rod снижались при дополнительном фракционировании полученных иммуноконъюгатов на гельфильтрующем носителе и составляли 7,94±1,8 для МКАТ ICO 204 и 3,32±1,2 для Трастузумаба. Полученные иммуноконъюгаты ICO 204 сохраняли антигенсвязывающую активность, сопоставимую с нативными антителами. Была отмечена зависимость включения Rod в состав иммуноконъюгата от метода фракционирования МКАТ. Так, использование кислотной элюции при фракционировании МКАТ на протеине G снижало плотность включения Rod в состав иммуноконъюгата. Использование Rod-пиперазина позволило получить иммуноконъюгаты с МКАТ ICO 204 и Трастузумабом по окисленным углеводным остаткам антител. Максимальная плотность включения родамина В в ICO 204 составила 2,3±0,3 моля на моль IgG и 0,2±0,12 для Трастузумаба.
Заключение. В рамках выполнения работы осуществлён химический синтез двух производных Rod, изначально не имеющего химических групп для взаимодействия с IgG. На основе полученных соединений синтезированы модельные иммуноконъюгаты с высокой степенью включения Rod, сохраняющие свою антигенсвязывающую активность. Таким образом, показана возможность использования для создания иммуноконъюгатов фармакологических веществ, имеющих в своей структуре карбоксильные группы, непригодные для осуществления подобного синтеза, показана перспективность модификации фармакологических веществ по карбоксильной группе пиперазином и SMCC для получения иммуноконъюгатов.